一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生要求

1    范圍

本文件規(guī)定了一次性使用衛(wèi)生用品的原材料衛(wèi)生要求、生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求、產(chǎn)品衛(wèi)生要求、包裝、 運(yùn)輸和貯存、標(biāo)識要求，描述了相應(yīng)的檢測方法。

本文件適用于銷售和使用的一次性使用衛(wèi)生用品。

2   規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款 。其中，注日期的引用文 件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單） 適用 于本文件。

GB/T 191   包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志 GB 5749   生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB/T 8939   衛(wèi)生巾（護(hù)墊）

GB/T 15981   消毒器械滅菌效果評價(jià)方法

GB/T 26367   胍類消毒劑衛(wèi)生要求

GB/T 26369   季銨鹽類消毒劑衛(wèi)生要求

GB/T 27741   紙和紙板   可遷移性熒光增白劑的測定

GB/T 27947   酚類消毒劑衛(wèi)生要求

GB/T 28004.1   紙尿褲   第 1 部分 ：嬰兒紙尿褲

GB/T 28004.2   紙尿褲   第 2 部分 ：成人紙尿褲

GB/T 38496   消毒劑安全性毒理學(xué)評價(jià)程序和方法 GB 38598   消毒產(chǎn)品標(biāo)簽說明書通用要求

GB 50073   潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

WS/T 10009   消毒產(chǎn)品檢測方法

中華人民共和國藥典（國家藥品監(jiān)督管理局、 國家衛(wèi)生健康委員會）

消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范［衛(wèi)生部（2009 年版）］

3    術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

一次性使用衛(wèi)生用品   disposable sanitary products

與人體直接接觸的，為達(dá)到人體生理衛(wèi)生或抗菌、抑菌目的的一次性使用日常生活用品。

注： 主要包括婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品 、排泄物衛(wèi)生用品（不包括廁所用紙）和衛(wèi)生濕巾 、抗菌劑 、抑菌劑等其他衛(wèi)生 用品。

3.2

衛(wèi)生濕巾   hygiene wet wipes

以非織造布、織物、木漿復(fù)合布、木漿紙等為載體，適量添加生產(chǎn)用水和殺菌成分等原材料，對處 理對象（如手、皮膚、黏膜及普通物體表面） 具有清潔殺菌作用的濕巾。

GB 15979—2024

注： 僅包括與手、皮膚或（和） 黏膜直接接觸的衛(wèi)生濕巾。 ［來源：WS 575—2017 ，3.2，有修改］

3.3

抗菌劑   antibacterial agent

直接接觸人體完整皮膚或黏膜，具有一定殺菌（細(xì)菌和酵母菌） 作用，但不以治療疾病或者改善皮 膚、黏膜的癥狀為目的的制劑。

注： 不包括人體足部、眼睛、指甲、腋部、頭皮、頭發(fā)、鼻黏膜、肛腸等特定部位。

3.4

抑菌劑   bacteriostatic agent

直接接觸人體完整皮膚或黏膜，具有一定抑菌（細(xì)菌和酵母菌） 作用，但不以治療疾病或者改善皮 膚、黏膜的癥狀為目的的制劑。

注： 不包括人體足部、眼睛、指甲、腋部、頭皮、頭發(fā)、鼻黏膜、肛腸等特定部位。

3.5

生產(chǎn)車間   production workshop

生產(chǎn)加工一次性使用衛(wèi)生用品的場所。

注： 包括配料間（區(qū)）、制作加工間（區(qū)）、分（灌） 裝間（區(qū)）、 內(nèi)包裝間（區(qū) ）等 。其中，分裝企業(yè)生產(chǎn)車間 包括分（灌） 裝間（區(qū)）、 內(nèi)包裝間（區(qū) ）等。

［來源：《消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》（2009 年版） ，第十二條，有修改］

3.6

高吸水材料   super absorbent materials

能夠吸收自身質(zhì)量數(shù)倍至數(shù)百倍液態(tài)水 ,吸收后具有保水和貯水能力的吸收體。 注： 吸收體由高分子化合物、紙漿和無紡布等構(gòu)成。

4   原材料衛(wèi)生要求

4.1   原材料應(yīng)符合消毒產(chǎn)品相關(guān)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)的要求，無毒、無害 。原材料包裝應(yīng)清楚標(biāo)明內(nèi)含物的名 稱、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)日期或生產(chǎn)批號 ；有特殊要求的原材料應(yīng)標(biāo)明貯存條件和保質(zhì)期。

4.2   不應(yīng)使用廢棄或使用過的一次性使用衛(wèi)生用品作為原材料或半成品。

4.3   原材料中不得添加下列禁用物質(zhì)。

a） 抗（抑） 菌劑中不應(yīng)添加列入《中華人民共和國藥典》 的藥品及其同名原料（消毒防腐藥、 中 藥和抑菌劑除外，也不包括藥用輔料和純化水）； 疫苗、血清或毒素及其制品等用于產(chǎn)生主動 或被動免疫的制劑，用于診斷免疫狀態(tài)的制劑，蛋白 、多肽制劑（溶菌酶 、溶葡萄球菌酶除 外）； 列入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》 的禁用化學(xué)物質(zhì)（碘除外）； 國家衛(wèi)生健康行政部門規(guī)定 的其他禁止使用的物質(zhì)及其他對人體健康有明確危害的物質(zhì)。

b） 衛(wèi)生濕巾和其他具有抗（抑） 菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品不應(yīng)添加抗菌藥物 、抗真菌藥物、 抗病毒藥物、激素類藥物及其同名原料等和國家衛(wèi)生健康行政部門規(guī)定的其他禁止使用的物質(zhì)   及其他對人體健康有明確危害的物質(zhì)。

c） 非織造布、織物或其他原材料不應(yīng)添加可遷移性熒光增白劑等禁用成分。

4.4   根據(jù)產(chǎn)品工藝規(guī)程選用符合相應(yīng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)用水 。濕巾、衛(wèi)生濕巾和抗（抑） 菌劑的生 產(chǎn)用水應(yīng)符合《中華人民共和國藥典》中純化水要求，其他一次性使用衛(wèi)生用品的生產(chǎn)用水應(yīng)符合 GB 5749 和企業(yè)相關(guān)規(guī)范的要求，并保證產(chǎn)品使用安全、有效。

5    生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求

5.1   原輔料的購入、貯存、發(fā)放、使用應(yīng)滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制要求并符合管理制度規(guī)定。

5.2   生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生指標(biāo)要求如下。

a） 抗（抑） 菌劑生產(chǎn)車間空氣應(yīng)符合《消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》的要求，凈化車間應(yīng)符合 GB   50073 的要求 ； 其他 一 次性使用衛(wèi)生用品生產(chǎn)車間空氣中菌落總數(shù)應(yīng)小于或等于 2 500 CFU/m3（空氣采樣器法） 或應(yīng)小于或等于16 CFU/（皿·5 min）（平皿暴露法）。

b） 直接接觸未包裝產(chǎn)品的工作臺表面菌落總數(shù)應(yīng)小于或等于20 CFU/cm2。

c） 直接接觸未包裝產(chǎn)品的工人手表面菌落總數(shù)應(yīng)小于或等于300 CFU/只手（套）。

5.3    消毒級一次性使用衛(wèi)生用品初始污染菌應(yīng)小于或等于 10 000 CFU/g 或 CFU/mL。

5.4   應(yīng)對用于消毒級一次性使用衛(wèi)生用品的消毒方法進(jìn)行消毒效果檢測，并應(yīng)符合以下要求：

a） 環(huán)氧乙烷消毒 ：對枯草桿菌黑色變種 （ATCC 9372）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00；

b） 電離輻射消毒 ：對短小桿菌E601（ATCC 27142）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00；

c） 壓力蒸汽消毒 ：對嗜熱脂肪桿菌 （ATCC 7953）芽孢的殺滅對數(shù)值大于或等于3.00。

6   產(chǎn)品衛(wèi)生要求

6.1    感官要求

外觀應(yīng)整潔，符合產(chǎn)品固有性狀，不應(yīng)有掉毛、掉屑現(xiàn)象，不應(yīng)有異常氣味與異物。

6.2    理化要求

6.2.1   理化指標(biāo)應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。

表 1    理化指標(biāo)

6.2.2   衛(wèi)生濕巾、抗（抑） 菌劑和其他含有抗（抑） 菌成分的一次性使用衛(wèi)生用品有效成分含量應(yīng)符合 產(chǎn)品標(biāo)簽說明書標(biāo)注的含量，其中用于手、皮膚、黏膜的產(chǎn)品，限用物質(zhì)使用濃度應(yīng)符合表 2 的規(guī)定。

表2    限用物質(zhì)使用濃度

6.3    毒理學(xué)安全性要求

6.3.1   產(chǎn)品首次上市時(shí)，婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品、排泄物衛(wèi)生用品、濕巾、衛(wèi)生濕巾、抗（抑） 菌劑和其他衛(wèi)生用品中乳墊、一次性內(nèi)褲、衛(wèi)生手套或指套、化妝棉（紙、 巾 ）及嬰兒用紙、紙巾、棉柔巾、衛(wèi)生 棉（棒、簽、球等） 等應(yīng)進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn) 。 當(dāng)原材料、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化可能影響產(chǎn)品毒性時(shí)，應(yīng)按 要求重新進(jìn)行產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)。

6.3.2   毒理學(xué)試驗(yàn)應(yīng)按表 3 進(jìn)行，指標(biāo)符合表 4 的規(guī)定。

表3    毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目

表4    毒理學(xué)指標(biāo)

6.4   微生物學(xué)指標(biāo)

微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表 5 的規(guī)定。

GB 15979—2024

表5   微生物學(xué)指標(biāo)

6.5    衛(wèi)生濕巾及抗（抑）菌衛(wèi)生用品抗（抑）菌性能

6.5.1   衛(wèi)生濕巾除應(yīng)符合表 5 中的微生物學(xué)指標(biāo)外，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌率應(yīng)大于或等 于 90％； 如標(biāo)明對致病性酵母菌有殺菌作用，對白色念珠菌的殺菌率應(yīng)大于或等于 90％； 如標(biāo)明對其 他微生物有殺滅作用，對相應(yīng)微生物的殺菌率應(yīng)大于或等于 90％。

6.5.2   具有抗菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品除應(yīng)符合表 5 中的同類同級產(chǎn)品微生物學(xué)指標(biāo)外，對大腸桿 菌和金黃色葡萄球菌的殺菌率應(yīng)大于或等于 90％（振蕩燒瓶試驗(yàn)方法殺菌率應(yīng)大于 26％）； 如標(biāo)明對 致病性酵母菌或其他微生物有殺滅作用，對白色念珠菌或相應(yīng)微生物的殺菌率應(yīng)達(dá)到上述要求。

6.5.3   具有抑菌功能的一次性使用衛(wèi)生用品除應(yīng)符合表 5 中的同類同級產(chǎn)品微生物學(xué)指標(biāo)外，對大腸桿 菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率應(yīng)大于或等于 50％（振蕩燒瓶試驗(yàn)方法抑菌率應(yīng)大于 26％，高吸水材料 抑菌率應(yīng)大于或等于 99％） 或抑菌環(huán)直徑大于 7.0 mm；如標(biāo)明對致病性酵母菌或其他微生物有抑菌作 用，對白色念珠菌或相應(yīng)微生物的抑菌率或抑菌環(huán)應(yīng)達(dá)到上述要求。

7   檢測方法

7.1    生產(chǎn)過程衛(wèi)生要求檢測方法

7.1.1   生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生要求檢測方法按照附錄 A 要求執(zhí)行。

7.1.2   初始污染菌檢測方法按照附錄 B 要求執(zhí)行。

7.1.3    消毒效果檢測評價(jià)方法按照附錄 C 要求執(zhí)行。

7.2   產(chǎn)品衛(wèi)生要求檢測方法

7.2.1   產(chǎn)品外觀采用目測、鼻嗅的方法進(jìn)行測定。

GB 15979—2024

7.2.2   衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊等吸水產(chǎn)品pH 按 GB/T 8939 的方法進(jìn)行測定，其他產(chǎn)品pH 有相應(yīng)測定標(biāo)準(zhǔn) 的按相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行測定，無相應(yīng)測定標(biāo)準(zhǔn)的按WS/T 10009 的方法進(jìn)行測定。

7.2.3    可遷移性熒光增白劑： 衛(wèi)生巾（ 護(hù)墊 ）按 GB/T 893 9 的方法進(jìn)行測定 ； 紙尿褲分別按 GB/T 28004.1、GB/T 28004.2 的方法進(jìn)行測定 ；其他衛(wèi)生用品按 GB/T 27741 的方法進(jìn)行測定。

7.2.4   鉛、砷、汞的檢測按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》 的方法進(jìn)行測定。

7.2.5   產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法按照附錄 D 要求執(zhí)行。

7.2.6   產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性測試方法按照附錄 E 要求執(zhí)行。

7.2.7    葡萄糖酸氯己定 、 醋酸氯己定按照 GB/T 2636 7 及國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法進(jìn)行測定； 2,4,4’?三氯?2’?羥基二苯醚按照 GB/T 27947 及國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法進(jìn)行測定 ；苯扎溴銨、苯 扎氯銨按 GB/T 26369 及國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法進(jìn)行測定 ；其他有效成分含量按照 WS/T 10009 及國 家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法進(jìn)行測定 ；無法使用化學(xué)測定法的不測定。

7.2.8   產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)方法按照附錄 F 要求執(zhí)行。

7.2.9   產(chǎn)品微生物檢測方法按照附錄 B 要求執(zhí)行。

8    包裝、運(yùn)輸和貯存

8.1   無外包裝影響衛(wèi)生質(zhì)量的原材料應(yīng)有包裝 ； 直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料應(yīng)無毒、無害、清潔 ；包 裝材料應(yīng)保證產(chǎn)品在正常運(yùn)輸與貯存條件下不受污染。包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志應(yīng)符合 GB/T l91 要求。

8.2   應(yīng)按照運(yùn)輸與貯存要求進(jìn)行運(yùn)輸或貯存。

9   標(biāo)識

9.1   產(chǎn)品標(biāo)簽說明書應(yīng)符合 GB 38598 的有關(guān)要求。

9.2    消毒級產(chǎn)品還應(yīng)在銷售包裝上標(biāo)注 “ 消毒級”字樣、殺滅或抑制微生物類別、消毒方法和消毒日 期 ；在運(yùn)輸包裝上標(biāo)注“ 消毒級”字樣、生產(chǎn)日期及有效期或生產(chǎn)批號及限用使用日期。

9.3   原材料中有表 2 規(guī)定的限用物質(zhì)時(shí)，應(yīng)在包裝上標(biāo)識。

10   標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施

本文件實(shí)施之日前生產(chǎn)或進(jìn)口的產(chǎn)品，在符合 GB 15979—2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》 的前提下，可以銷售至產(chǎn)品標(biāo)示的有效期（保質(zhì)期） 限為止。

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附   錄   A

（規(guī)范性）

生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生要求檢測方法

A.1    空氣采樣與測試方法

A.1.1   樣品采集

室內(nèi)面積小于或等于 30 m2 ，在對角線上設(shè)里 、 中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻 1.0 m；室內(nèi)面積大 于 30 m2 ，設(shè)東 、西、南、北、 中 5 個(gè)采樣點(diǎn)，周圍 4 個(gè)采樣點(diǎn)距墻 1.0 m。生產(chǎn)企業(yè)也可根據(jù)實(shí)際生產(chǎn) 線的布局自行增加培養(yǎng)基數(shù)量和放置位置。

空氣采樣器法： 可選擇六級撞擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器 。采樣時(shí)，將采樣器置于 室內(nèi)中央 0.8 m～1.5 m 高度，按采樣器使用說明書操作，且每次采樣時(shí)間不應(yīng)超過 30 min。

平皿暴露法 ：采樣時(shí)，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平皿（直徑 9 cm）置采樣點(diǎn)（0.8 m～1.5 m 高度 ），

無菌操作打開平皿蓋，扣放于平皿邊緣，使平皿在空氣中暴露 5 min 后蓋上平皿蓋，及時(shí)送檢。

空氣采樣首選空氣采樣器法。

A.1.2    菌落總數(shù)檢測

在采樣前將準(zhǔn)備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，取出檢查有無污染，將污染培 養(yǎng)基剔除。

將已采集的培養(yǎng)皿在4 h 內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室， 于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h 觀察結(jié)果，計(jì)數(shù)平皿上菌落數(shù)。 平皿暴露法按平均每皿的菌落數(shù)報(bào)告：CFU/（皿·5 min）。

空氣采樣器法菌落總數(shù)計(jì)算見公式（A.1）：

Y =   × 1 000                                …………………………（A.1）

A.2    工作臺表面與工人手表面采樣與測試方法

A.2.1   樣品采集

A.2.1.1   工作臺 ：將經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為 5.0 cm×5.0 cm 的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用一支浸有滅菌 生理鹽水（或相應(yīng)中和劑） 的棉簽在其內(nèi)橫豎往返涂抹各 5 次，然后剪去或拗?jǐn)嗍纸佑|部分棉棒，以無 菌方式將棉簽放入含 10.0 mL 滅菌生理鹽水（或相應(yīng)中和劑） 的采樣管內(nèi)送檢。

A.2.1.2   工人手（套）： 被檢人五指并攏，用一支浸濕生理鹽水（或相應(yīng)中和劑）的棉簽在右手指曲 面，從指根到指端來回涂擦 2 次，然后剪去或拗?jǐn)嗍纸佑|部分棉棒，將棉簽放入含 10.0 mL 滅菌生理鹽 水（或相應(yīng)中和劑） 的采樣管內(nèi)送檢。

GB 15979—2024

A.2.2    菌落總數(shù)檢測

將已采集的樣品在 4 h 內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，每支采樣管充分振蕩混勻（宜使用渦旋振蕩器振蕩 ）后取 1.0 mL 樣液，放入滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個(gè)樣品平行接種兩塊平皿， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h，計(jì)數(shù)平皿上菌落數(shù)。

工作臺表面菌落總數(shù)計(jì)算見公式 (A.2)：

                    …………………………（A.2）

工人手菌落總數(shù)計(jì)算見公式 (A.3)：

Y2 = Y0 × 10                                        …………………………（A.3）

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附   錄    B

（規(guī)范性）

產(chǎn)品微生物檢測方法

B.1   產(chǎn)品采集與樣品處理

于同一批號的 3 個(gè)運(yùn)輸包裝中至少抽取 6 件最小銷售包裝樣品（若樣品數(shù)量不能滿足試驗(yàn)所需，則 應(yīng)相應(yīng)增加采樣數(shù)量 ） ，其中 1/3 樣品用于檢測， 2/3 樣品用于留樣 。抽樣的最小銷售包裝不應(yīng)有破 裂，檢驗(yàn)前不得開啟。

在空氣潔凈度 5 級凈化條件下用無菌方法打開至少 2 個(gè)包裝用于檢測，從每個(gè)包裝中取樣，準(zhǔn)確稱 取 10.0 g±1.0 g樣品。剪碎后加入到 200 mL 滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個(gè)生理鹽水樣液（若產(chǎn) 品太輕，可稱取 2.5 g±0.2 g樣品，加入 50 mL 滅菌生理鹽水中）。液體產(chǎn)品吸取 10.0 mL 原液直接作 樣液。

如被檢樣品具有抑菌或抗菌作用，應(yīng)選擇適宜的中和劑中和，稀釋梯度最高不超過 1∶100。 無相應(yīng) 中和劑則選用薄膜過濾法去除樣品中對微生物生長有影響的抑菌或抗菌成分，再按上述方法制備樣液。

如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時(shí)，稀釋液量可按每次 50 mL 遞增，直 至能吸出足夠測試用樣液。在計(jì)算細(xì)菌菌落總數(shù)與真菌菌落總數(shù)時(shí)相應(yīng)調(diào)整稀釋度。

B.2   初始污染菌與細(xì)菌菌落總數(shù)檢測方法

B.2.1    操作步驟

按 B.1 得到的生理鹽水或中和劑樣液自然沉降后取上清液，如需要可進(jìn)行 10 倍系列稀釋。選擇適宜 的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù) 。共接種 2 個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入 2.0 mL 樣液，然后用冷卻至 40 ℃~45 ℃ 左 右 熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 15 mL～20 mL 倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻 。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置 36 ℃± 1 ℃ 培養(yǎng) 48 h，計(jì)算平皿上的菌落數(shù)。

B.2.2    菌落計(jì)數(shù)

菌落呈片狀生長的平皿不宜采用，確保 2 塊平皿符合計(jì)數(shù)要求并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，按公式 (B.1) 計(jì)算

結(jié)果：

At =                                          …………………………（B.1）

式中：

At        ─細(xì)菌菌落總數(shù)，單位為每克菌落形成單位（CFU/g） 或每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；

A0       ─2塊營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上的細(xì)菌菌落總數(shù)；

K       ─稀釋倍數(shù)；

2×2   ─2塊平皿，每塊平皿接種2.0 mL樣液。                                                                                 

首先選取平均菌落數(shù)在 30 CFU～300 CFU 之間的平皿 。 當(dāng)菌落數(shù)小于或等于 100 CFU/g 或 CFU/mL，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于 100 CFU/g 或 CFU/mL 時(shí)采用二位有效數(shù)字 ； 當(dāng) 2 塊營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平 皿上的細(xì)菌菌落總數(shù)為 0 CFU 時(shí)，如為固體應(yīng)當(dāng)報(bào)告細(xì)菌菌落總數(shù)小于 5 CFU/g ，如為液體按稀釋倍數(shù) 報(bào)告。

B.2.3    結(jié)果報(bào)告

B.2.3.1   如經(jīng)首次檢測，樣品細(xì)菌菌落總數(shù)符合本文件的規(guī)定，直接按檢測結(jié)果報(bào)告。

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B.2.3.2   如經(jīng)首次檢測，樣品細(xì)菌菌落總數(shù)超過本文件的規(guī)定，應(yīng)用留存的樣品依前法復(fù)測 2 次，然后 才能報(bào)告結(jié)果 。 當(dāng) 2 次復(fù)測結(jié)果都達(dá)到本文件的規(guī)定，則判定被檢樣品合格， 以 2 次合格結(jié)果的均值報(bào) 告 ； 其中有任何 1 次復(fù)測結(jié)果超過本文件規(guī)定，則判定被檢樣品不合格，以所有不合格結(jié)果的均值 報(bào)告。

B.3   大腸菌群檢測方法

B.3.1    操作步驟

B.3.1.1   增菌培養(yǎng) ：取樣液 5.0 mL 接種至 50 mL 乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，如 不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報(bào)告為大腸菌群陰性。

B.3.1.2   分離培養(yǎng)： 如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍(lán)瓊脂平皿， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察 平皿上菌落形態(tài) 。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光 澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。

B.3.1.3    染色鏡檢與鑒定： 取疑似菌落 1 個(gè)～2 個(gè)作革蘭染色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管， 置 36 ℃± 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。

B.3.2    結(jié)果報(bào)告

凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍(lán)平皿上有典型大腸菌群菌落，革蘭 染色為陰性無芽孢桿菌，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸菌群。

B.4   銅綠假單胞菌檢測方法

B.4.1    操作步驟

B.4.1.1   增菌培養(yǎng)：取樣液 5.0 mL，加入到 50 mL SCDLP（Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate 簡稱）培 養(yǎng)液中，充分混勻，置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)18 h～24 h。如有銅綠假單胞菌生長，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培 養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。

B.4.1.2   分離培養(yǎng)： 從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平皿，置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察菌落特征 。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平無定型， 向周邊擴(kuò)散，或蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基常擴(kuò)散有水溶性色素 。在缺乏十六烷 基三甲基溴化銨瓊脂時(shí)也可用乙酰胺培養(yǎng)基進(jìn)行分離，將菌懸液劃線接種于平皿上， 放 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察菌落特征 。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培 養(yǎng)基略帶粉紅色。

B.4.1.3   染色鏡檢： 取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落涂片作革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性菌者還需進(jìn)行下列

試驗(yàn)。

B.4.1.4    氧化酶試驗(yàn) ：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻棒挑取鑒定培養(yǎng)基上可疑 菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1％二甲基對苯二胺試液， 30 s 內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅 色，為氧化酶試驗(yàn)陽性，不變色者為陰性。亦可使用商品化的氧化酶試紙或試劑進(jìn)行檢測。

B.4.1.5    綠膿菌素試驗(yàn)： 取鑒定培養(yǎng)基上 2 個(gè)～ 3 個(gè)可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜 面，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，加入三氯甲烷 3 mL～5 mL ，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解， 待三氯甲烷呈藍(lán)色時(shí)，用吸管移到另一試管中并加入 1.0 mol/L 的鹽酸 1 mL，振蕩后靜置片刻 。如上層 出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。

B.4.1.6    硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn) ：取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落接種在硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中， 置 36 ℃±1 ℃ 培 養(yǎng) 24 h，培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽性。

B.4.1.7    明膠液化試驗(yàn)： 取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)， 置 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 24 h，取出放于 4 ℃~10 ℃,如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。

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B.4.1.8    42 ℃ 生長試驗(yàn)： 取鑒定培養(yǎng)基上可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 置 42 ℃ 培養(yǎng)24 h～48 h，有銅綠假單胞菌生長為陽性。

B.4.1.9   其他檢驗(yàn) ：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據(jù)商品試劑說明書對可疑菌落進(jìn)行鑒定。

B.4.2    結(jié)果報(bào)告

被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實(shí)為革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)均為陽性者，即可報(bào)告 被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌 。如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和 42 ℃ 生長試驗(yàn)三 者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。

B.5    金黃色葡萄球菌檢測方法

B.5.1    操作步驟

B.5.1.1    增菌培養(yǎng)： 取樣液 5.0 mL，加入到 50 mL SCDLP 培養(yǎng)液中，充分混勻， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)18 h～24 h。

B.5.1.2   分離培養(yǎng)：自上述增菌懸液中取 1～2 接種環(huán)，劃線接種 Baird Parker 培養(yǎng)基（首選） 或血瓊脂 培養(yǎng)基， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h～48 h。在 Baird Parker 培養(yǎng)基上為圓形，光滑，凸起，濕潤，直徑為 2.0 mm～3.0 mm,顏色呈灰色到黑色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明帶，用接種針接觸菌落似有 奶油樹膠的軟度 。偶爾會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明帶 。在血瓊脂平皿上典型菌落 呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。

B.5.1.3   染色鏡檢 ：挑取典型菌落，涂片作革蘭染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭陽性球菌，排列成葡 萄狀，無芽孢與莢膜。鏡檢符合上列情況，還需進(jìn)行甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)和血漿凝固酶試驗(yàn)。

B.5.1.4    甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) ：取血瓊脂平皿上典型菌落接種甘露醇培養(yǎng)液， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵 甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。

B.5.1.5    血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）： 吸取 1:4 新鮮血漿或凍干血漿生理鹽水溶液 0.5 mL，放滅菌小試 管中，加入等量待檢菌 24 h 肉湯培養(yǎng)物 0.5 mL，混勻，放 36 ℃±1 ℃ 溫箱或水浴中， 每 30 min 觀察一 次，24 h 之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。 同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各 0.5 mL 作為陽性 與陰性對照。

B.5.1.6   其他檢驗(yàn) ：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據(jù)商品試劑說明書對可疑菌落進(jìn)行鑒定。

B.5.2    結(jié)果報(bào)告

凡在瓊脂平皿上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血 漿凝固酶試驗(yàn)陽性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。

B.6    溶血性鏈球菌檢測方法

B.6.1    操作步驟

B.6.1.1   增菌培養(yǎng) ：取樣液 5.0 mL 加入到 50 mL 葡萄糖肉湯中，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h。

B.6.1.2   分離培養(yǎng) ：將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h 觀察菌落特征 。溶血性 鏈球菌在血瓊脂平皿上為灰白色，半透明或不透明，表面突起，圓形，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無 色透明 β 型溶血。

B.6.1.3   染色鏡檢 ：挑取典型菌落作涂片革蘭染色鏡檢，應(yīng)為革蘭陽性，呈鏈狀排列的球菌 。鏡檢符合 上述情況，還需進(jìn)行鏈激酶試驗(yàn)和桿菌肽敏感試驗(yàn)。

B.6.1.4   鏈激酶試驗(yàn)： 吸取草酸鉀血漿 0.2 mL（0.01 g 草酸鉀加 5.0 mL 兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸 取上清液） ，加入 0.8 mL 滅菌生理鹽水，混勻后再加入待檢菌 24 h 肉湯培養(yǎng)物 0.5 mL 和 0.25％氯化鈣 0.25 mL，混勻， 放 36 ℃±1 ℃ 水浴中， 2 min 觀察一次（一般 10 min 內(nèi)可凝固 ），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄熔化時(shí)間 。如 2 h 內(nèi)不熔化，繼續(xù)放置 24 h 觀察，如凝塊全部熔化為陽性， 24 h 仍不熔化為陰 性 (依據(jù)商品試劑說明書)。

B.6.1.5   桿菌肽敏感試驗(yàn) ：將被檢菌懸液涂于血瓊脂平皿上，用滅菌鑷子取每片含 0.04 單位桿菌肽的紙 片放在平皿表面上，同時(shí)以已知陽性菌株作對照， 在 36 ℃±1 ℃ 下放置 24 h～48 h ，有抑菌帶者為 陽性。

B.6.1.6   其他檢驗(yàn) ：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據(jù)商品試劑說明書對可疑菌落進(jìn)行鑒定。

B.6.2    結(jié)果報(bào)告

鏡檢革蘭陽性鏈狀排列球菌，血瓊脂平皿上呈現(xiàn)溶血圈，鏈激酶和桿菌肽試驗(yàn)陽性，可報(bào)告被檢樣 品檢出溶血性鏈球菌。

B.7    真菌菌落總數(shù)檢測方法

B.7.1    操作步驟

按 B.1 得到的生理鹽水或中和劑樣液自然沉降后取上清液，如需要可進(jìn)行 10 倍系列稀釋。選擇適宜 的稀釋度進(jìn)行真菌菌落計(jì)數(shù) 。共接種 2 個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入 2.0 mL 樣液，然后用冷卻至 40 ℃~ 45 ℃ 熔化的沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基或改良沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基 15 mL～20 mL 倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂 凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置 25 ℃±1 ℃（沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基） 或 28 ℃±1 ℃（改良沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基） 培養(yǎng) 72 h，分別于第 24 h、第 48 h、第 72 h 觀察，計(jì)算平皿上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延，以前一次的菌 落計(jì)數(shù)為準(zhǔn)。

B.7.2    菌落計(jì)數(shù)

菌落呈片狀生長的平皿不應(yīng)采用；確保 2 塊平皿符合計(jì)數(shù)要求并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，按公式 (B.2) 計(jì)算結(jié)果：

Bt =                                          …………………………（B.2）

式中：

Bt        ─真菌菌落總數(shù)，單位為每克菌落形成單位（CFU/g） 或每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；

B0        ─2塊沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基或改良沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基平皿上的真菌菌落總數(shù)；

K       ─稀釋倍數(shù)；

2×2   ─2塊平皿，每塊平皿接種2.0 mL樣液。

當(dāng)菌落數(shù)小于或等于 100 CFU CFU/g 或 CFU/mL 時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告 ； 當(dāng)大于 100 CFU/g 或

CFU/mL 時(shí)采用二位有效數(shù)字 ； 當(dāng) 2 塊沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基或改良沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基平皿上真菌菌落總數(shù) 為 0 CFU 時(shí)，如為固體應(yīng)報(bào)告真菌菌落總數(shù)小于 5 CFU/g，如為液體按稀釋倍數(shù)報(bào)告。

B.7.3    結(jié)果報(bào)告

B.7.3.1   如經(jīng)首次檢測，樣品菌落總數(shù)符合本文件的規(guī)定，直接按檢測結(jié)果報(bào)告。

B.7.3.2   如經(jīng)首次檢測，樣品菌落總數(shù)超過本文件的規(guī)定，應(yīng)用留存的備檢樣品依前法復(fù)測 2 次，然后才能報(bào)告結(jié)果 。 當(dāng) 2 次復(fù)測結(jié)果都達(dá)到本文件的規(guī)定，則判定被檢樣品合格， 以 2 次合格結(jié)果的均值報(bào)告 ； 其中有任何 1 次復(fù)測結(jié)果超過本文件規(guī)定，則判定被檢樣品不合格，以所有不合格結(jié)果的均值 報(bào)告。

B.8    真菌定性檢測方法

B.8.1    操作步驟

取樣液 5.0 mL 加入到 50 mL 沙堡弱液體培養(yǎng)基或改良沙堡弱液體培養(yǎng)基中， 25 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 72 h，逐日觀察有無真菌生長。

B.8.2    結(jié)果報(bào)告

如培養(yǎng)管澄清，則說明無真菌生長，可報(bào)告被檢樣品未檢出真菌 ；如培養(yǎng)管混濁，應(yīng)轉(zhuǎn)種沙堡弱瓊 脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，證實(shí)有真菌生長，可報(bào)告被檢樣品檢出真菌。

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附   錄   C

（規(guī)范性）

消毒效果檢測評價(jià)方法

C.1   環(huán)氧乙烷消毒

按 GB/T 15981 的方法進(jìn)行評價(jià)。

C.2    電離輻射消毒

C.2.1    電離輻射消毒效果評價(jià)用生物指示菌為短小桿菌 E601（ATCC 27142） 芽孢，在菌量為 5.0×

105 CFU/片～5.0×106 CFU/片時(shí)，其殺滅 90％微生物所需劑量 D10值應(yīng)為 1.7 kGy。

C.2.2    每次測試至少選 5 箱產(chǎn)品，每箱布放 3 片生物指示劑，置于最小劑量處。消毒完畢，取出指示菌 片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液做定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基做定量檢測，將未處理陽性對照菌片做相同接 種，兩者均置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 。 陽性對照應(yīng)在 24 h 內(nèi)有菌生長 。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察 7 d（或按使 用說明書中的培養(yǎng)時(shí)間 ）全部無菌生長，可報(bào)告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格 。定量培養(yǎng)樣品與陽性 對照相比殺滅對數(shù)值大于或等于 3.00 也可報(bào)告消毒合格。

C.3   壓力蒸汽消毒

按 GB/T 15981 的方法進(jìn)行評價(jià)。

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附   錄    D

（規(guī)范性）

產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量檢測方法

D.1   樣品采集

于環(huán)氧乙烷消毒后，立即從同一消毒批號的 3 個(gè)運(yùn)輸包裝中隨機(jī)抽取一定量最小銷售包裝樣品，采 樣量至少應(yīng)滿足試驗(yàn)所需（平行測試 2 次） 規(guī)定的量，并留一定量樣品在需要復(fù)測時(shí)備用。

分別于環(huán)氧乙烷消毒后 24 h 及以后每隔數(shù)天進(jìn)行殘留量測定，直至殘留量降至 6.2.1 所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn) 值以下。

D.2    儀器與試劑

D.2.1    儀器

D.2.1.1   氣相色譜儀，配有火焰離子化檢測器 （FID）。

D.2.1.2   分析天平，精確到 0.1 mg。

D.2.1.3   機(jī)械振蕩器。

D.2.1.4    冰箱： 能使樣品保存在 2 ℃~8 ℃ 之間。

D.2.1.5   氣體調(diào)節(jié)器 ：用于開、關(guān)環(huán)氧乙烷氣瓶。

D.2.1.6   氣密性注射器 ：容量為 1.0 mL、10.0 mL、50 mL、100 mL，用于標(biāo)準(zhǔn)氣體配制及把標(biāo)準(zhǔn)氣體 注入液相色譜。

D.2.1.7   微量注射器 ：容量為 10 μL，用于向氣相色譜儀中注入浸提溶液。

D.2.1.8   平底螺蓋瓶 ：體積能夠容納樣品及浸提溶液，具有聚四氟乙烯 （PTFE）   襯墊的硅橡膠塞，用 于樣品浸提。

D.2.2   試劑

D.2.2.1   環(huán)氧乙烷 ：裝在適當(dāng)?shù)臍馄恐械挠凶C標(biāo)準(zhǔn)氣體。

D.2.2.2   水 ：純度適合于氣相色譜。

D.2.2.3    載氣和輔助氣體。載氣： 高純氮?dú)猓?9.999％）。 輔助氣體 ：氫氣、空氣。

D.3    操作步驟

D.3.1   標(biāo)準(zhǔn)氣體配制

用 100 mL 氣密性注射器抽取環(huán)氧乙烷飽和氣（重復(fù)放空 2 次，以排除原有空氣 ） ，塞上橡皮頭， 用 10 mL 氣密性注射器抽取上述 100 mL 氣密性注射器中純環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣 10 mL，用潔凈空氣稀釋到 100 mL（可將 10 mL 標(biāo)準(zhǔn)氣注入到已有 90 mL 潔凈空氣的帶橡皮塞頭的氣密性注射器中來完成）。 用同 樣的方法根據(jù)需要再逐級稀釋，配制 4 個(gè)～5 個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)氣體 。根據(jù)環(huán)氧乙烷的純度、稀釋倍數(shù)和室 溫，計(jì)算出環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣體的配制濃度。

稀釋后標(biāo)準(zhǔn)氣體濃度計(jì)算見公式（D.1）：

c =   ×                …………………………（D.1）

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p       ─純度；

D.3.2   樣品處理

至少取 2 個(gè)最小包裝產(chǎn)品，將其剪碎，隨機(jī)精確稱取 0.5 g～2 . 0 g ，放入適當(dāng)體積的平底螺蓋瓶 中，加入 2.0 mL～5.0 mL 去離子水，確保樣品完全浸沒于浸提溶液中，加蓋密封后充分搖勻，放置 4 h 或振蕩 30 min 待用 。如被檢樣品為吸水樹脂材料產(chǎn)品，可適當(dāng)增加去離子水量，以確保至少可吸出 2 mL 樣品浸提溶液 。如果檢測不能馬上進(jìn)行，則將浸提溶液從樣品中分離出來，密封于有聚四氟乙烯 襯墊的瓶中蓋緊。任何盛有標(biāo)準(zhǔn)溶液或浸提液的管瓶，其頂端空間應(yīng)少于總體積的 10％，浸提溶液可在 5 ℃±3 ℃ 的冰箱中暫時(shí)貯存，并于浸提當(dāng)天檢測。

D.3.3   分析

待儀器穩(wěn)定后，在同樣條件下，環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣體各進(jìn)樣 1.0 mL，待分析樣品（樣品浸提溶液） 各 進(jìn)樣 1.0 μL，每一樣液平行做 2 次測定。

根據(jù)保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積（或峰高） 進(jìn)行定量計(jì)算，取平均值。

D.3.4    儀器操作參考條件

D.3.4.1    色譜柱 ：極性石英毛細(xì)管色譜柱（ 固定相為聚乙二醇） 或其他等效色譜柱。

D.3.4.2   柱溫：90 ℃。

D.3.4.3   進(jìn)樣口溫度：220 ℃。

D.3.4.4    載氣： 高純氮?dú)狻?/p>

D.3.4.5    載氣流量：5.0 mL/min。

D.3.4.6   檢測器溫度：230 ℃。

D.3.4.7   氫氣流量：40 mL/min。

D.3.4.8    空氣流量：400 mL/min。

D.3.5   計(jì)算

以所進(jìn)環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)氣的微克數(shù)對所得峰面積 (或峰高) 作環(huán)氧乙烷工作曲線。

以樣品中環(huán)氧乙烷對應(yīng)的峰面積（或峰高）在工作曲線上求得環(huán)氧乙烷的量 A   (μg）   ，并以公

式（D.2） 求得產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷的殘留量。

X =   m V進(jìn)…………………………（D.2）

式中：

X     ─產(chǎn)品中環(huán)氧乙烷殘留量，單位為微克每克(μg/g）；

A     ─從工作曲線中所查得環(huán)氧乙烷量，單位為微克(μg）；

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附   錄    E

（規(guī)范性）

產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能與穩(wěn)定性檢測方法

E.1   樣品采集

于同一批號 3 個(gè)運(yùn)輸包裝中至少抽取 6 件最小銷售包裝樣品（若樣品數(shù)量不能滿足試驗(yàn)所需，則應(yīng) 相應(yīng)增加采樣數(shù)量 ） ，其中 1/3 樣品用于抑菌、抗菌或殺菌性能測試， 2/3 樣品用于留樣 ； 如需做穩(wěn)定 性測試，樣品數(shù)量再作相應(yīng)增加。

E.2   試驗(yàn)方法選擇原則

E.2.1   衛(wèi)生濕巾選擇衛(wèi)生濕巾殺菌性能試驗(yàn)。

E.2.2    液體抗菌劑選擇抗菌劑殺菌性能試驗(yàn) ； 黏稠狀（半固體） 抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)； 添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗(yàn) ；含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬殺菌試驗(yàn) ；含有非溶出性抗菌物質(zhì)的產(chǎn)品選擇振蕩燒瓶試驗(yàn)。

E.2.3    液體抑菌劑選擇抑菌劑抑菌性能試驗(yàn) ； 黏稠狀（半固體） 抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)；

含溶出性抑菌成分的固體抑菌產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗(yàn)或抑菌環(huán)試驗(yàn) ；含有溶出性抑菌成分的紡織品選擇 浸漬抑菌試驗(yàn) ；含有非溶出性抑菌物質(zhì)的產(chǎn)品選擇振蕩燒瓶試驗(yàn) ；含高吸水材料的產(chǎn)品選擇高吸水材料 抑菌性能試驗(yàn)。

E.3   試驗(yàn)材料 E.3.1   試驗(yàn)菌

E.3.1.1   試驗(yàn)菌種類

細(xì)菌：大腸桿菌 (8099 或 CICC 10899）或大腸桿菌 （ATCC 25922），金黃色葡萄球菌 (ATCC 6538 或ATCC 25923)。

酵母菌： 白色念珠菌 (ATCC 10231)。 根據(jù)產(chǎn)品特定用途所需用的其他菌株。

E.3.1.2   試驗(yàn)菌懸液制備

取冷凍條件下保存的菌種（凍干管、甘油管或磁珠） ，在無菌操作下打開，加入適量營養(yǎng)肉湯，輕 柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散 。取含 5.0 mL～10 . 0 mL 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h。 用接種環(huán)取第 1 代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h。挑取上述第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面， 36 ℃±1 ℃ 培 養(yǎng) 18 h～24 h 即為第 3 代培養(yǎng)物 。取菌株第 3 代～第 6 代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌為沙堡弱瓊脂培養(yǎng) 基） 新鮮斜面培養(yǎng)物（18 h～24 h） ，用 5.0 mL 0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（簡稱 PBS） 洗下菌苔，使菌 懸浮均勻后用 PBS 稀釋至所需濃度（浸漬抑菌試驗(yàn)使用肉湯對培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋）。

E.3.2   試驗(yàn)器材

E.3.2.1    培養(yǎng)基： 細(xì)菌培養(yǎng)用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，酵母菌培養(yǎng)用沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基 ； 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，沙 堡弱液體培養(yǎng)基。

E.3.2.2   稀釋液：0.03 mol/L PBS ，pH 7.2。 E.3.2.3    中和劑 （PBS 配制）。

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E.3.2.4    載體：3 2 支紗/cm×32 支紗/cm 脫脂白平紋布片（長×寬=10 mm×10 mm）（衛(wèi)生濕巾： 長×寬=20 mm×30 mm），經(jīng)壓力蒸汽滅菌烤干后使用 。

E.3.2.5   計(jì)時(shí)器。

E.3.2.6    電子天平。

E.3.2.7   振蕩搖床。

E.3.2.8    大于或等于 2 000 r/min 渦旋振蕩器。

E.3.2.9   恒溫水浴箱。

E.3.2.10    36 ℃ 培養(yǎng)箱。

E.3.2.11    37 ℃、35 ℃~40 ℃、40 ℃~45 ℃ 和 54 ℃ 恒溫箱。

E.3.2.12    Ⅱ級生物安全柜。

E.4    衛(wèi)生濕巾殺菌性能試驗(yàn)

E.4.1    適用范圍

適用于添加有殺菌成分的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品的抗菌性能效果鑒定。

E.4.2    中和劑鑒定試驗(yàn)

E.4.2.1   試驗(yàn)菌種 ：根據(jù)產(chǎn)品殺滅微生物類別，選擇對其敏感度較高的細(xì)菌，如宣稱對酵母菌有殺滅作 用，需增加白色念珠菌 ； 當(dāng)用其他特定微生物進(jìn)行殺菌試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)以該特定微生物進(jìn)行中和劑鑒定 試驗(yàn)。

E.4.2.2    中和劑試驗(yàn)分組：

第 1 組：5.0 mL 中和劑+染菌對照片→ 培養(yǎng)；

第 2 組：（樣片+5.0 mL 中和劑）+染菌對照片→ 培養(yǎng)；

第 3 組：5.0 mL PBS+染菌對照片→ 培養(yǎng)；

第 4 組： 同批次 PBS 0.5 mL＋中和劑 0.5 mL＋培養(yǎng)基→ 培養(yǎng)。 E.4.2.3    中和劑試驗(yàn)評價(jià)規(guī)定如下：

a） 第1組、第2組和第3組有相似量試驗(yàn)菌生長，并在1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片之間，其 組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%;

b） 第4組無菌生長；

c） 連續(xù)3次試驗(yàn)均符合以上要求判定為合格。

E.4.3   試驗(yàn)步驟

對照樣片應(yīng)與試驗(yàn)樣片同等材質(zhì)、 同等大小但不含殺菌成分，且經(jīng)滅菌處理 ；將 100 μL 試驗(yàn)菌懸液 滴于對照樣片上，回收菌數(shù)應(yīng)為 1.0×104 CFU/片～9.0×104 CFU/片。

取試驗(yàn)樣片（大小 20 mm×30 mm，厚度應(yīng)確保菌懸液被完全吸收不滲漏，如被測試樣品厚度無法 滿足要求，可增加片數(shù)） 和對照樣片各 1 片分別置于無菌平皿內(nèi)，用新鮮制備的菌懸液分別在每個(gè)試驗(yàn) 樣片與對照樣片上滴加 100 μL，均勻涂布，開始計(jì)時(shí)，作用至說明書規(guī)定時(shí)間，用無菌鑷子分別將試驗(yàn) 樣片和對照樣片放入 5.0 mL 相應(yīng)中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，中和作用 10 min 后進(jìn)行 10 倍系列稀釋， 選擇適宜稀釋度，吸取 1.0 mL 接種平皿，每管接種 2 個(gè)平皿，將冷至 40 ℃~45 ℃ 熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng) 基（細(xì)菌） 或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌） ，傾注于已加入樣液的平皿中，每平皿 15 mL～20 mL，轉(zhuǎn) 動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行 活菌菌落計(jì)數(shù)。

重復(fù)試驗(yàn) 3 次，計(jì)算殺菌率。

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E.4.4   計(jì)算

殺菌率計(jì)算見公式 （E.1）：

× 100％             …………………………（E.1）

式中：

K   ─殺菌率；

Nc   ─對照樣片平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─被試樣片平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E     ─組間菌落數(shù)誤差率；

Xm   ─三組間菌落平均數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Xn    ─各組菌落平均數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.4.5    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

各次殺菌率均大于或等于 90％，產(chǎn)品有殺菌作用 。 衛(wèi)生濕巾的最長殺菌作用時(shí)間不應(yīng)超過 5 min。

E.5   產(chǎn)品抗菌性能試驗(yàn)

E.5.1    抗菌劑殺菌性能試驗(yàn)

E.5.1.1    適用范圍

適用于液體抗菌劑或衛(wèi)生濕巾擠出液對微生物抗菌效果的測定。

E.5.1.2    中和劑鑒定試驗(yàn)

E.5.1.2.1   試驗(yàn)菌種： 根據(jù)產(chǎn)品殺滅微生物類別，選擇對其敏感度較高的細(xì)菌，如宣稱對酵母菌有殺滅 作用，需增加白色念珠菌 ； 當(dāng)用其他特定微生物進(jìn)行殺菌試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)以該特定微生物進(jìn)行中和劑鑒定 試驗(yàn)。

E.5.1.2.2    中和劑試驗(yàn)分組：

第 1 組：4.5 mL 中和劑＋0.4 mL 硬水＋0.1 mL 菌懸液→ 培養(yǎng)；

第 2 組：（0.4 mL 樣液＋4.5 mL 中和劑）＋0.1 mL 菌懸液→ 培養(yǎng)； 第 3 組：4.9 mL PBS ＋0.1 mL 菌懸液→ 培養(yǎng)；

第 4 組： 同批次 PBS 0.5 mL＋中和劑 0.5 mL＋培養(yǎng)基→ 培養(yǎng)。 E.5.1.2.3    中和劑試驗(yàn)評價(jià)規(guī)定：

a） 第1組、第2組、第3組有相似量試驗(yàn)菌生長，并在1.0×104   CFU/mL～9.0×104   CFU/mL之間， 其組間菌落數(shù)誤差率［計(jì)算見公式 （E.2）］ 應(yīng)不超過15%;

b） 第4組無菌生長；

c） 連續(xù)3次試驗(yàn)均符合以上要求判定為合格。

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E.5.1.3   試驗(yàn)步驟

取新鮮制備的菌懸液 0.5 mL 滴加于 4.5 mL 樣液內(nèi)，混勻后開始計(jì)時(shí)，作用至說明書規(guī)定時(shí)間，用 定量吸管吸取菌藥混懸液 0.5 mL 放入 4.5 mL 含有中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，中和作用 10 min 后進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度，分別吸取 1.0 mL 接種平皿，每管接種 2 個(gè)平皿，將冷至 40 ℃~45 ℃ 熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌） 或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌） ，傾注于已加入樣液的平皿中，每平皿 15 mL～20 mL ，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù) 。試驗(yàn)同時(shí)用稀釋液代替試樣，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽性對照，回 收菌數(shù)為 1.0×104 CFU/mL～9.0×104 CFU/mL。

重復(fù)試驗(yàn) 3 次，計(jì)算殺菌率。

E.5.1.4   計(jì)算

殺菌率計(jì)算見公式 （E.3）：

…………………………（E.3）

式中：

K   ─殺菌率；

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）。

E.5.1.5    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

說明書規(guī)定時(shí)間的各次殺菌率均大于或等于 90％，判有抗菌作用 ；說明書規(guī)定時(shí)間的各次殺菌率均 大于或等于 99％，判有較強(qiáng)抗菌作用 。

抗菌劑的最長殺菌作用時(shí)間不應(yīng)超過 5 min。

E.5.2    載體浸泡定量殺菌試驗(yàn) E.5.2.1    適用范圍

適用于黏稠狀（半固體） 抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液等對微生物抗菌效果的鑒定。

E.5.2.2    染菌載體制備

取試驗(yàn)菌 24 h 新鮮斜面培養(yǎng)物用 PBS 洗下， 用 PBS 稀釋至約 5.0×106   CFU/mL～5 . 0×10 7 CFU/mL 制成菌懸液備用 。用微量移液器滴染 10 μL 菌懸液于滅菌載體上， 35 ℃±1 ℃ 烘干或室溫晾干 備用。

E.5.2.3    中和劑鑒定試驗(yàn) E.5.2.3.1   試驗(yàn)分組

第 1 組：5.0 mL 中和劑 + 染菌載體 → 培養(yǎng)。

第 2 組：（含抗菌劑的載體 + 5.0 mL 中和劑 ）+ 染菌載體→ 培養(yǎng)。 第 3 組：5.0 mL 稀釋液 + 染菌載體→ 培養(yǎng)。

第 4 組 ：稀釋液 + 中和劑 + 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng)。

E.5.2.3.2   試驗(yàn)步驟

根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，依次進(jìn)行編號。

GB 15979—2024

第 1 組： 取 5.0 mL 中和劑于無菌平皿中， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，加入 1 片染菌載體，作用 10 min，取出菌片放入 5.0 mL 中和劑試管內(nèi)，作用 10 min 后，置渦旋振蕩器上振蕩 1 min 或在手掌上用 力振打 80 次，將試驗(yàn)菌洗下，用中和劑做 10 倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋度，分別吸取 1.0 mL 接種于 2 個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 2 組 ：取 5.0 mL 中和劑于無菌平皿內(nèi)，加入 1 片沾有抗菌樣品的載體，混勻， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 作用 10 min 制成中和產(chǎn)物。再用無菌鑷子取 1 片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用 10 min 后，用無菌鑷子 取出染菌載體移入含 5.0 mL 中和產(chǎn)物試管中，作用 10 min，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，用中和產(chǎn)物做 10 倍 系列稀釋 ,選適宜稀釋度分別吸取 1.0 mL 接種于 2 個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 3 組： 取 5.0 mL PBS 于無菌平皿中，置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，加入 1 片染菌載體，作用 10 min， 取出菌片放入 5.0 mL PBS 試管內(nèi)，作用 10 min 后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下， 用 PBS 做 10 倍系列稀釋 , 選 適宜稀釋度分別吸取 1.0 mL 接種于 2 個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 4 組： 分別吸取稀釋液（PBS）   與中和劑各 1.0 mL 于同一無菌平皿內(nèi)，倒入同批次的培養(yǎng)基15 mL～20 mL，培養(yǎng)觀察。

E.5.2.3.3    結(jié)果判定

第 1 組、第 2 組和第 3 組有相似量試驗(yàn)菌生長，且菌量在 1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片 。計(jì) 算組間菌落數(shù)誤差率［計(jì)算見公式 （E.2）］ ，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過 15％。

第 4 組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。 試驗(yàn) 3 次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。

E.5.2.4   試驗(yàn)步驟

按 5.0 g/片的量稱取抗菌樣品于無菌平皿內(nèi)， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，用無菌鑷子取染菌載體，使 載體完全浸沒于抗菌樣品中，立即計(jì)時(shí)。

待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間（ 以說明書規(guī)定時(shí)間為 T，時(shí)間分別 為 0.5T 、 T、 1.5T） ，分別取染菌載體加入 5.0 mL 中和劑試管中，混勻。

經(jīng)中和劑作用 10 min 后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取 1.0 mL 樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存 活菌數(shù)，每管樣液接種 2 個(gè)平皿 。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí)，可用 PBS 進(jìn)行系列 10 倍稀釋后，再 進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

取與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的對照樣品代替抗菌樣品浸泡 2 片染菌載體，進(jìn)行平行試驗(yàn)， 作為陽性對照 。 陽性對照回收菌量為 1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片 。取同批次稀釋液、 中和劑、 培養(yǎng)基作陰性對照。

所有試驗(yàn)樣品和對照樣品均在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì) 數(shù)。重復(fù)試驗(yàn) 3 次，計(jì)算殺菌率。                                                           

E.5.2.5    殺菌率計(jì)算

殺菌率計(jì)算見公式 （E.4）：

K =   × 100％             …………………………（E.4）

式中：

K   ─殺菌率；

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

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E.5.2.6    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

說明書規(guī)定時(shí)間的各次殺菌率均大于或等于 90％，判有抗菌作用 ；說明書規(guī)定時(shí)間的各次殺菌率均 大于或等于 99％，判有較強(qiáng)抗菌作用 。

E.5.3    載體殺菌試驗(yàn) E.5.3.1    適用范圍

適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品抗菌性能效果的鑒定。

E.5.3.2    菌懸液配制及樣片制備

取試驗(yàn)菌 24 h 新鮮斜面培養(yǎng)物用 PBS 洗下， 用 PBS 稀釋至 1.0×105   CFU/mL～9.0×105   CFU/mL， 制成菌懸液備用。

用無菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)相同但不含抗菌成分的對照樣品分別剪成 20 mm×30 mm 樣片備用。 試驗(yàn)時(shí)滴加 100 μL 菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng) 121 ℃ 15 min 滅菌處理。

E.5.3.3    中和劑鑒定試驗(yàn) E.5.3.3.1   試驗(yàn)分組

第 1 組：5.0 mL 中和劑 + 染菌對照樣片 → 培養(yǎng)。

第 2 組：（5.0 mL 中和劑 + 抗菌樣片）+ 染菌對照樣片 → 培養(yǎng)。

第 3 組：5.0 mL 稀釋液 + 染菌對照樣片→ 培養(yǎng)。 第 4 組 ：稀釋液 + 中和劑 + 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng)。

E.5.3.3.2   試驗(yàn)步驟

根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，依次進(jìn)行編號。

第 1 組 ：取 5.0 mL 中和劑于無菌試管內(nèi)， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，用無菌鑷子取 1 片染菌對照樣片 加入試管內(nèi)，作用 10 min，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，用中和劑做 10 倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取 1.0 mL 接種于 2 個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 2 組： 取 5.0 mL 中和劑于無菌試管內(nèi)，用無菌鑷子取 1 片抗菌樣片加入試管內(nèi)，振蕩混勻置 20 ℃±1 ℃ 水浴作用 10 min 制成中和產(chǎn)物，再夾入 1 片染菌對照樣片，作用 10 min，振蕩將試驗(yàn)菌洗 下，用中和產(chǎn)物做 10 倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度分別吸取 1.0 mL 接種 2 個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 3 組 ：取 5.0 mL PBS 于無菌試管內(nèi)，置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，用無菌鑷子取 1 片染菌對照樣片加 入試管內(nèi)，作用 10 min ，振蕩將試驗(yàn)菌洗下， 用 PBS 做 10 倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取 1.0 mL 接種 2 個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第 4 組： 分別吸取稀釋液與中和劑各 1.0 mL 于同一無菌平皿內(nèi)，傾注同批次的培養(yǎng)基 15 mL~20 mL，培養(yǎng)觀察。

E.5.3.3.3    結(jié)果判定

第 1 組、第 2 組和第 3 組有相似量試驗(yàn)菌生長，且菌量在 1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片 。計(jì) 算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過 15％。

第 4 組無菌生長，否則，說明試劑有污染，應(yīng)更換無污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。 試驗(yàn)重復(fù) 3 次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。

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E.5.3.4   試驗(yàn)步驟

取無菌平皿，用無菌鑷子取 3 片試驗(yàn)樣片，勿重疊， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，在每一樣片上滴加 0.1 mL 試驗(yàn)用菌懸液，立即計(jì)時(shí)。

待試驗(yàn)菌與樣片相互作用至各預(yù)定時(shí)間（以說明書規(guī)定時(shí)間為 T，時(shí)間分別為 0.5T、T、1.5T） ， 分別夾取染菌樣片加于 5.0 mL 中和劑試管中，混勻。

經(jīng)中和劑作用 10 min 后，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取 1.0 mL 樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活 菌數(shù)，每管樣液接種 2 個(gè)平皿 。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí)， 可 10 倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng) 計(jì)數(shù)。

同時(shí)用不含殺菌成分，其他成分相同的對照樣片 2 片代替試驗(yàn)樣片，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽性對 照 。 陽性對照回收菌落數(shù)在 1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片 。取試驗(yàn)同批次稀釋液、 中和劑、培養(yǎng) 基作陰性對照。

所有試驗(yàn)樣本和對照樣本均在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì) 數(shù)。試驗(yàn)重復(fù) 3 次，計(jì)算殺菌率。

E.5.3.5    殺菌率計(jì)算

殺菌率計(jì)算見公式 （E.5）：

K =   × 100%…………………………（E.5）

式中：

K   ─殺菌率；

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.5.3.6    結(jié)果判定

各次試驗(yàn)說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率大于或等于 90%，判有抗菌作用 ；各次試驗(yàn)說明書規(guī)定時(shí)間的殺 菌率大于或等于 99%，判有較強(qiáng)抗菌作用 。

E.5.4   浸漬殺菌試驗(yàn)

E.5.4.1    適用范圍

適用于抗菌毛巾 、抗菌棉襪 、抗菌棉布等含有溶出性抗菌材料的抗菌織物對微生物抗菌效果的 試驗(yàn)。

E.5.4.2   試樣和菌懸液制備

E.5.4.2.1   試樣

在距試樣布邊 10.0 cm 以上、離布端 1.0 m 以上部位，剪取直徑為 5.0 cm 的圓形試樣若干，取 3 份試 樣分別裝于 3 個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸收 1.0 mL 菌懸液且錐形瓶中不留殘液為度）。 另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抗菌劑對照織物若干， 取 2 份分別裝于 2 個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口， 121 ℃ 滅菌 15 min 備用。

E.5.4.2.2    菌懸液的制備

用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，取典型的菌落 移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，用肉湯對培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋，使菌懸液的含菌量為 1.0×105 CFU/mL～5.0×105 CFU/mL。

E.5.4.3   試驗(yàn)步驟

分別取 1.0 mL 菌懸液加入 2 份準(zhǔn)備好的錐形瓶內(nèi)試樣和 1 份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形 瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)，造成細(xì)菌死亡。

分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物的錐形瓶中加入 100 mL 中和劑，置渦旋振蕩器上 振蕩 1 min 洗滌細(xì)菌， 取 1.0 mL 進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿，作為 “0” 接觸 時(shí)間樣品和對照織物上的細(xì)菌數(shù)。

將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 20 h±2 h，加入 100 mL 中和劑，置渦旋 振蕩器上振蕩 1 min 洗滌細(xì)菌， 取 1.0 mL 進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿，作為試 驗(yàn)組。

陰性對照組： 試樣不接種菌懸液，在 “0” 接觸時(shí)間加入 100 mL 中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1 min 取樣，接種平皿。

陽性對照組： 另取 1 個(gè)裝有對照織物的錐形燒瓶，接種 1.0 mL 菌懸液后， 在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)20 h± 2 h，加入 100 mL PBS，置渦旋振蕩器上振蕩1 min 洗滌細(xì)菌，取 1.0 mL 進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選適當(dāng)稀 釋度以傾注法接種平皿。

將陰性和陽性對照樣品與試驗(yàn)組樣品接種的平皿一并于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h，計(jì)數(shù)菌落數(shù) 。試驗(yàn)3次。

產(chǎn)品對白色念珠菌等其他微生物抗菌效果的測試方法同上，選擇相應(yīng)的菌株、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

E.5.4.4    殺菌率的計(jì)算     

殺菌率計(jì)算見公式 （E.6）：

K =   NtN(或)t或N(N c或)c 或[(N[t(N(+)tcN)2)/(])2(－)] Ns   × 100％    …………………………（E.6）

式中：

K   ─殺菌率；

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Nt    ─ “0”接觸時(shí)間被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Nc   ─ “0”接觸時(shí)間陽性對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

如果 Nt和 Nc 差別較大時(shí)，取較大值 ；如果 Nt和 Nc 差別不大時(shí)，取平均值。

E.5.4.5    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.5.4.5.1    “0” 接觸時(shí)間對照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在 1.0×103 CFU/片～5.0×103 CFU/片。

E.5.4.5.2    陰性對照應(yīng)無菌生長，陽性對照菌數(shù)比 “0” 接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。

E.5.4.5.3   各次試驗(yàn)的殺菌率均大于或等于 90％，即可認(rèn)定該樣品具有抗菌作用 ；各次殺菌率均大于或 等于 99％，判有較強(qiáng)抗菌作用 。

E.5.5   振蕩燒瓶試驗(yàn) E.5.5.1    適用范圍

適用于對含非溶出性抗菌物質(zhì)抗菌產(chǎn)品的抗菌性能檢測。

注1： 在進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)前，需要鑒定其抗菌成分是否可溶出，如果有溶出性抗菌材料，參照可溶出抗菌材料檢 測，無溶出性抗菌材料，選用振蕩燒瓶法進(jìn)行。

注2： 非溶出性抗菌材料的鑒定 ：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡 24 h（通過預(yù)試驗(yàn)，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要求 ），取浸泡液參照 E.5.1 抗菌劑殺菌性能試驗(yàn)檢驗(yàn)是否有抗菌效果 。如果無抗菌效果，說明樣品屬非溶出性 抗菌材料，進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)。

E.5.5.2   試驗(yàn)步驟

E.5.5.2.1   將材料剪切成 10 mm×10 mm樣片，稱取 0.75 g 兩份分別置入 250 mL 的錐形燒瓶中。

E.5.5.2.2    在上述錐形燒瓶中加入 70 mL PBS 和 5.0 mL 新鮮制備的菌懸液，使菌懸液在 PBS 中的濃度 為 1.0×104 CFU/mL～5.0×104 CFU/mL。

E.5.5.2.3    將錐形燒瓶固定于振蕩搖床上， 在 20 ℃~25 ℃ 條件下，以 300 r/min 振搖 2 min，吸取 1.0 mL 作為試驗(yàn)組振蕩前樣液 ；繼續(xù)振搖至 1 h，吸取 1.0 mL 樣液作為試驗(yàn)組振蕩后樣液。

E.5.5.2.4   用 PBS 對振蕩前和振蕩后樣液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，每個(gè)平皿加樣液 1.0 mL，以瓊脂傾注法接種 平皿，每個(gè)樣液分別接種兩個(gè)平皿，培養(yǎng)后進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù)。

E.5.5.2.5    同時(shí)設(shè)陰性對照樣片組和不加樣片組 。 陰性對照樣片組的對照樣片應(yīng)與試驗(yàn)樣片同等材質(zhì)、 同等大小但不含抗菌成分，且經(jīng)滅菌處理 ； 不加樣片組分別取 5.0 mL 菌懸液和 70 mL PBS 加入

250 mL 三角燒瓶中，混勻，分別于振蕩前和振蕩后預(yù)定時(shí)間，各取 1.0 mL 菌懸液與 PBS 的混合液進(jìn)行 適當(dāng)稀釋，進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù)。

E.5.5.2.6    以試驗(yàn)同批次的稀釋液、培養(yǎng)基分別設(shè)陰性對照。

E.5.5.2.7   重復(fù)試驗(yàn) 3 次。

E.5.5.3   計(jì)算公式

殺菌率計(jì)算見公式 （E.7）：

K =   × 100%…………………………（E.7）

式中：

K   ─殺菌率；

Nc   ─樣品振蕩前平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─樣品振蕩后平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.5.5.4    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.5.5.4.1   各次試驗(yàn)陰性對照均應(yīng)無菌生長。

E.5.5.4.2   不加樣片組活菌計(jì)數(shù)在 1.0×104   CFU/片～5.0×104   CFU/片之間，且樣品振蕩前后平均菌落 數(shù)差值在 10％以內(nèi)，試驗(yàn)有效。

E.5.5.4.3   各次試驗(yàn)中，試驗(yàn)樣片殺菌率與對照樣片殺菌率的差值大于 26％，產(chǎn)品具有抗菌作用 。 E.5.5.4.4   抗菌纖維類產(chǎn)品的最長抗菌作用時(shí)間不應(yīng)超過 1 h。

E.5.5.5    注意事項(xiàng)

E.5.5.5.1   振蕩前應(yīng)將振蕩搖床上的錐形瓶固定牢，以免碰破。

E.5.5.5.2   試驗(yàn)中，在試驗(yàn)誤差允許的范圍內(nèi)，如果試驗(yàn)樣片和對照樣片出現(xiàn)振蕩后菌落數(shù)高于振蕩前 菌落數(shù)的情況，其殺菌率可按 “0”計(jì)算。

E.6   產(chǎn)品抑菌性能試驗(yàn)

E.6.1    抑菌劑抑菌性能試驗(yàn) E.6.1.1    適用范圍

適用于液體抑菌劑對微生物抑菌效果的測定。

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E.6.1.2   試驗(yàn)步驟

取新鮮制備的菌懸液 0.5 mL 滴加于 4.5 mL 樣液內(nèi)，混勻后開始計(jì)時(shí)，作用至預(yù)定時(shí)間，用定量吸 管吸取菌藥混懸液 0.5 mL 放入 4.5 mL 稀釋液的試管內(nèi)，充分混勻，分別吸取 1.0 mL 接種平皿，每管接 種 2 個(gè)平皿，將冷至 40 ℃~45 ℃ 熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌） 或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌） ，傾 注于已加入樣液的平皿中，每平皿 15 mL～20 mL ，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù) 。試驗(yàn)同時(shí)用稀釋液代替試樣，進(jìn) 行平行試驗(yàn)，作為陽性對照，回收菌數(shù)為 1.0×104 CFU/mL～9.0×104 CFU/mL。

試驗(yàn) 3 次，計(jì)算抑菌率。

E.6.1.3   計(jì)算

抑菌率計(jì)算見公式 （E.8）：

Y =   × 100%………………………（E.8）

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）；

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每毫升菌落形成單位（CFU/mL）。

E.6.1.4    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

各次試驗(yàn)抑菌率 Y 均大于或等于 50％到小于 90％之間，產(chǎn)品有抑菌作用 ；各次試驗(yàn)抑菌率均大于 或等于 90％，產(chǎn)品有較強(qiáng)抑菌作用 。

抑菌劑的最長抑菌作用時(shí)間不應(yīng)超過 5 min。

E.6.1.5    注意事項(xiàng)

若由原液接種的平皿上菌落數(shù)大于 300 CFU 或難以計(jì)數(shù)時(shí)，才需進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選擇適宜稀 釋度平皿作活菌菌落計(jì)數(shù)。

E.6.2    載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)

E.6.2.1    適用范圍

適用于黏稠狀（半固體） 抑菌產(chǎn)品（如抑菌洗手液等） 對微生物抑菌效果的測定。

E.6.2.2   試驗(yàn)步驟

取試驗(yàn)菌 24 h 新鮮斜面培養(yǎng)物用 PBS 洗下， 用 PBS 稀釋至約 5.0×106   CFU/mL～5 . 0×10 7 CFU/mL 制成菌懸液備用 。用微量移液器滴染 10 μL 菌懸液于滅菌載體上， 35 ℃±1 ℃ 烘干或室溫晾干 備用。

按 5.0 g/片的量稱取樣品于無菌平皿內(nèi)， 置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，用無菌鑷子取染菌載體，使載體 完全浸沒于樣品中，立即計(jì)時(shí) 。待染菌載體與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時(shí)間，分別取染菌載體加入 5.0 mL PBS 試管中，混勻，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取 1.0 mL 樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存 活菌數(shù)，每管樣液接種 2 個(gè)平皿 。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí)，可用 PBS 進(jìn)行 10 倍系列稀釋后，再 進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù) 。取 10.0 g與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣品浸泡 2 片染菌載體進(jìn)行平行 試驗(yàn)，作為陽性對照 。 陽性對照回收菌量為 1.0×104 CFU/片～9.0×104 CFU/片 。取同批次 PBS、 培養(yǎng) 基作陰性對照 。所有試驗(yàn)樣品和對照樣品接種平皿均在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母 菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù) 。重復(fù)試驗(yàn) 3 次，計(jì)算抑菌率。

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E.6.2.3   計(jì)算

抑菌率計(jì)算見公式 （E.9）：

…………………………（E.9）

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─試驗(yàn)樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.6.2.4    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

各次試驗(yàn)抑菌率 Y 均大于或等于 50％到小于 90％之間，判有抑菌作用 ；各次試驗(yàn)抑菌率均大于或 等于 90％，判有較強(qiáng)抑菌作用 。

E.6.3    載體抑菌試驗(yàn)

E.6.3.1    適用范圍

適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護(hù)墊、尿布等固體類抑菌產(chǎn)品對微生物抑 菌效果的測定。                                                                                           

E.6.3.2   試驗(yàn)步驟

取試驗(yàn)菌 24 h 新鮮斜面培養(yǎng)物用 PBS 洗下， 用 PBS 稀釋至 5.0×105   CFU/mL～5.0×106   CFU/mL， 制成菌懸液備用。

用滅菌剪刀在無菌條件下將試驗(yàn)樣品和對照樣品分別剪成 20 mm×30 mm 樣片備用 。試驗(yàn)時(shí)滴加 100 μL 菌懸液 。對照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌 。取無菌平皿，用無菌鑷子取 2 片試驗(yàn)樣片，勿重 疊，置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，在每一樣片上滴加 100 μL 試驗(yàn)用菌懸液，立即計(jì)時(shí) 。待試驗(yàn)菌與樣片接 觸作用至說明書的規(guī)定時(shí)間，分別夾取染菌樣片加于 5.0 mL PBS 試管中，混勻 。振蕩洗脫，分別吸取 1.0 mL 樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種 2 個(gè)平皿 。如平板上生長的菌落數(shù)較多 時(shí)，可 10 倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

同時(shí)用與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對照樣片 2 片代替試驗(yàn)樣片進(jìn)行試驗(yàn)，作為陽性對照， 陽性對照回收菌量為 1.0×104 CFU/片～9.0×104 CFU/片 ；取同批次 PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。

所有試驗(yàn)樣本和對照樣本均在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細(xì)菌） 或 72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì) 數(shù)。試驗(yàn)重復(fù) 3 次，計(jì)算抑菌率。

E.6.3.3    抑菌率計(jì)算

抑菌率計(jì)算見公式 （E.10）：

× 100%…………………………（E.10）

Nc   ─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Ns    ─試驗(yàn)樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.6.3.4    結(jié)果判定

各次試驗(yàn)抑菌率 Y 大于或等于 50％到小于 90％之間，判有抑菌作用 ；各次試驗(yàn)抑菌率大于或等于90%，判有較強(qiáng)抑菌作用 。

E.6.4    抑菌環(huán)試驗(yàn)

E.6.4.1    適用范圍

適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，或可制成直徑為 5.0 mm 片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定 ；也可用 于鑒別抑菌產(chǎn)品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。

E.6.4.2    載體和器材

E.6.4.2.1    液體材料試驗(yàn)載體：5.0 mm 直徑圓形濾紙片，經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理后， 置 120 ℃ 烤干 2 h， 保存?zhèn)溆谩?/p>

E.6.4.2.2   微量移液器：5.0 μL～50 μL，可調(diào)式。

E.6.4.2.3   游標(biāo)卡尺。

E.6.4.3    操作步驟

E.6.4.3.1   試驗(yàn)樣片的制備 ：對液體材料，取無菌并干燥的濾紙片 。每片滴加產(chǎn)品實(shí)際使用濃度的溶液 5.0 μL，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平皿內(nèi)，開蓋置 37 ℃ 恒溫箱中烤干，或置室溫下自然干燥后備 用。對固體材料，可直接制成直徑為 5.0 mm、厚度不超過 4.0 mm 的圓片（塊） ，每 4 片（塊） 一組。

E.6.4.3.2    陰性對照樣片的制備 ：對液體材料，取無菌干燥濾紙片 ,每片滴加無菌蒸餾水 5.0 μL，干燥后 備用。對固體材料，對照樣片應(yīng)與試驗(yàn)樣片同等材質(zhì)、 同等大小但不含抑菌成分。

E.6.4.3.3   試驗(yàn)菌的接種 ：用無菌棉拭子蘸取濃度為 5.0×105   CFU/mL～5.0×106   CFU/mL 新鮮制備的 試驗(yàn)菌懸液，在適宜的培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹 3 次 。每涂抹 1 次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動 60°,最后將棉拭子繞平 板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥 5 min。

E.6.4.3.4   樣片貼放： 每次試驗(yàn)貼放 1 個(gè)染菌平板 ,每個(gè)平板貼放 4 片試驗(yàn)樣片， 1 片陰性對照樣片， 共 5 片 。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面，陰性對照樣片貼于平板中心位置，試驗(yàn)樣片貼于四周 。各樣 片中心之間相距 25 mm 以上，與平板的周緣相距 15 mm 以上 。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片 ,使其緊 貼于平板表面 。蓋好平皿， 置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)箱，培養(yǎng) 16 h～18 h 測量結(jié)果 。用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的 直徑（包括貼片） 并記錄。試驗(yàn) 3 次（共 12 個(gè)樣片）。

測量抑菌環(huán)時(shí)，應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進(jìn)行。測量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。

  E.6.4.4    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.6.4.4.1   抑菌作用的判斷 ：抑菌環(huán)直徑大于 7.0 mm者，判為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑小于或等于 7.0 mm 者，判為無抑菌作用。

E.6.4.4.2   重復(fù)試驗(yàn) 3 次（共 12 個(gè)樣片） 均有抑菌作用結(jié)果者，判為有抑菌作用。

E.6.4.4.3    陰性對照組應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生，否則試驗(yàn)無效。 E.6.4.5    注意事項(xiàng)

E.6.4.5.1   每次試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陰性對照，不可省略，在報(bào)告中亦應(yīng)將對照組的結(jié)果列出。

E.6.4.5.2   接種用細(xì)菌懸液的濃度應(yīng)符合要求。

E.6.4.5.3   應(yīng)保持瓊脂濃度的準(zhǔn)確性，否則可影響抑菌環(huán)的大小。

E.6.4.5.4   培養(yǎng)時(shí)間不得超過 18 h。培養(yǎng)過久，部分細(xì)菌可恢復(fù)生長，抑菌環(huán)變小。

E.6.4.5.5   抑菌環(huán)直徑可受抑菌劑的量、抑菌性能和干濕度影響。故抑菌劑濾紙片應(yīng)在試驗(yàn)當(dāng)天制備。

E.6.5   浸漬抑菌試驗(yàn)

E.6.5.1    適用范圍

適用于溶出性抑菌織物（如抑菌毛巾、 內(nèi)衣等） 抑菌效果的測定。

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E.6.5.2   試樣和菌懸液制備 E.6.5.2.1   試樣

在距試樣布邊 10.0 cm 以上、離布端 1.0 m 以上部位，剪取直徑為 5.0 cm 的圓形試樣若干，取 3 份試 樣分別裝于 3 個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定，以能吸收 1.0 mL 菌懸液且錐形瓶中不留殘液為度）。 另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對照織物若干， 取 2 份分別裝于 2 個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口， 121 ℃ 滅菌 15 min 備用。

E.6.5.2.2    菌懸液的制備

用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，取典型的菌落 移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，用肉湯對培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋，使菌懸液的含 菌量為 1.0×105 CFU/mL～5.0×105 CFU/mL。

E.6.5.3   試驗(yàn)步驟

分別取 1.0 mL 菌懸液加入 2 份準(zhǔn)備好的錐形瓶內(nèi)試樣和 1 份對照織物上，確保其均勻分布，且錐形 瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細(xì)菌死亡 。分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對照織物 的錐形瓶中加入 100 mL PBS，置渦旋振蕩器上振蕩 1 min 洗滌細(xì)菌，分別吸取 1.0 mL 樣液或 10 倍系列 稀釋液接種 2 個(gè)平皿，作為 “0” 接觸時(shí)間樣本和對照織物上的細(xì)菌數(shù)。

將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 20 h±2 h，加入 100 mL PBS，置渦旋振 蕩器上振蕩 1 min 洗滌細(xì)菌，分別吸取 1.0 mL 樣液或 10 倍系列稀釋液接種 2 個(gè)平皿，作為試驗(yàn)組。

陰性對照組，試樣不接種菌懸液，在 “0” 接觸時(shí)間加入 100 mL PBS，置渦旋振蕩器上振蕩 1 min 取樣，接種平皿。

陽性對照組，另取 1 個(gè)裝有對照織物的錐形燒瓶，接種 1.0 mL 菌懸液后， 在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)20 h± 2 h，加入 100 mL PBS，置渦旋振蕩器上振蕩1 min 洗滌細(xì)菌，分別吸取 1.0 mL 樣液或 10 倍系列稀釋液 接種 2 個(gè)平皿 。將陰性和陽性對照樣品與試驗(yàn)組樣品接種的平皿一并于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h，計(jì)數(shù)菌落 數(shù)。重復(fù)試驗(yàn) 3 次，計(jì)算抑菌率。

E.6.5.4   計(jì)算抑菌率

抑菌率計(jì)算見公式 （E.11）：

Y =   NtN(或)t或N(N c或)c 或[(N[t(N(+)tcN)2)/(])2(－)]Ns   × 100％   …………………………（E.11）

Ns    ─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Nt    ─ “0”接觸時(shí)間被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）；

Nc   ─ “0”接觸時(shí)間對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

如果 Nt和 Nc 差別較大時(shí)，取較大值 ；如果 Nt和 Nc 差別不大時(shí)，取平均值。 E.6.5.5    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.6.5.5.1    “0” 接觸時(shí)間對照織物的平均回收菌量應(yīng)為 1.0×103 CFU/片～5.0×103 CFU/片。

E.6.5.5.2    陰性對照應(yīng)無菌生長，陽性對照菌數(shù)比 “0” 接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。

E.6.5.5.3   各次試驗(yàn)的抑菌率均大于或等于 50％，即可判定該樣品具有抑菌作用 。

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E.6.6   振蕩燒瓶試驗(yàn) E.6.6.1    適用范圍

適用于對含非溶出性抑菌物質(zhì)的材料的抑菌性能檢測。

注1： 在進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)前，需要鑒定其抑菌成分是否可溶出，如果有溶出性抑菌材料，參照可溶出抑菌材料檢 測 ；無溶出性抑菌材料，選用振蕩燒瓶法進(jìn)行。

注2： 非溶出性抑菌材料的鑒定 ：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡 24 h（通過預(yù)試驗(yàn)，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要 求 ） ，取浸泡液參照 E.6.1 抑菌劑抑菌性能試驗(yàn)或參照 E.6.4 抑菌環(huán)試驗(yàn)檢驗(yàn)是否有抑菌效果 。如果無抑菌效 果，說明樣品屬非溶出性抑菌材料，進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)。

E.6.6.2   試驗(yàn)步驟 同 E.5.5.2。

E.6.6.3   計(jì)算

抑菌率計(jì)算見公式 （E.12）：

Y = 0％            …………………………（E.12）

式中：

Y ─抑菌率；

Nc─對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）； Ns─被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每片菌落形成單位（CFU/片）。

E.6.6.4    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.6.6.4.1   各次試驗(yàn)陰性對照均應(yīng)無菌生長。

E.6.6.4.2   不加樣片組活菌計(jì)數(shù)在 1.0×104   CFU/片～9.0×104   CFU/片之間，且樣品振蕩前后平均菌落 數(shù)差值在 10％以內(nèi)，試驗(yàn)有效。

E.6.6.4.3   各次試驗(yàn)中，試驗(yàn)樣片抑菌率與對照樣片抑菌率的差值大于 26％，產(chǎn)品具有抑菌作用 。 E.6.7    高吸水材料抑菌性能試驗(yàn)

E.6.7.1    適用范圍

本試驗(yàn)方法適用于含有非溶出性高吸水材料抑菌產(chǎn)品抑菌效果的測定。

注1：在進(jìn)行本試驗(yàn)前，需要鑒定其抑菌成分是否可溶出。

注2： 非溶出性抑菌材料的鑒定 ：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡 24 h（通過預(yù)試驗(yàn)，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要 求 ） ，取浸泡液參照 E.6.1 抑菌劑抑菌性能試驗(yàn)或參照 E.6.4 抑菌環(huán)試驗(yàn)檢驗(yàn)是否有抑菌效果 。如果無抑菌效 果，說明樣品屬非溶出性抑菌材料，進(jìn)行高吸水材料抑菌性能試驗(yàn)。

E.6.7.2   試樣制備

將 10 cm×30 cm 大小的食品級尼龍布（250 目 ）用封口機(jī)做成 10 cm×15 cm 的尼龍布袋，作為測定 吸液量備用。

測試樣品選取產(chǎn)品的抑菌層 。對照樣品應(yīng)與測試樣品選自相同部位，同等材質(zhì)、 同等大小但不含抑 菌成分。

E.6.7.3    吸液量的測定

取測試樣品和對照樣品分別剪成 5.0 mm×5.0 mm 的大小，各稱重 1.0 g±0.01 g（注意 ：邊剪邊稱， 稱量時(shí)使用稱量紙，避免高吸水材料灑出 ），分別放入預(yù)制的尼龍布袋中 。分別將含有測試樣品、對照

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樣品的尼龍布袋以及不含樣品的空尼龍布袋稱重后放入肉湯培養(yǎng)液（NB 培養(yǎng)基）中，浸泡 30 min（注 意去除氣泡） 后，吊起尼龍布袋 20 min 后分別稱重。測試樣品、對照樣品以及空的尼龍布袋分別測定三 次吸液量取平均值。吸液量測定步驟見圖 E.1。

圖E.1    吸液量測定步驟

吸液量計(jì)算見公式 （E.13） 和公式 （E.14）：

Sj = (Mj - B)-mj

…………………………

…………………………

（E.13）（E.14）

Mj   ─ 吸收后的含有吸水樣品的尼龍布袋的質(zhì)量，單位為克（g）；

mj     ─ 吸收前樣品的質(zhì)量，單位為克（g）；

B    ─ 吸收后尼龍布袋的質(zhì)量，單位為克（g）；

V    ─樣品平均吸液量，單位為克（g）。

E.6.7.4   試驗(yàn)步驟

菌懸液制備過程：用5.0mL 肉湯洗下菌苔，使菌懸浮均勻后使用肉湯稀釋至所需濃度（1.0×103CFU/mL～1.0×104 CFU/mL）。

取測試和對照樣品 0.2 g±0.002 g 分別放入玻璃試管中，根據(jù) E.6.7.3 算出的測試和對照樣品的吸液 量進(jìn)行換算，分別向測試及對照樣品中輕輕地滴入相應(yīng)的菌懸液 （1 . 0×10 3   CFU/mL～1 . 0× 104   CFU/mL）（接種菌懸液不應(yīng)接觸到玻璃試管壁）。 靜置 15 min 讓樣品充分吸收菌懸液后，輕輕地 蓋上試管蓋（請勿振蕩） ，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h。在培養(yǎng)后的對照樣、測試樣以及 “0” 培養(yǎng)時(shí)間的對照 樣和測試樣中，分別加入相應(yīng)吸液量 2 倍的含 2％吐溫 80 的 0.85％生理鹽水，分別充分震蕩后（在振蕩 器上振蕩 5 次，每次 5 s） ，進(jìn)行 10 倍系列稀釋，選擇適宜稀釋度，吸取 1.0 mL 接種平皿，每管接種 2 個(gè)平皿，每皿用涼至 40 ℃~45 ℃ 的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌） 或沙堡弱瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15 mL~

20 mL 做傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分混勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿， 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（ 細(xì)菌 ）或

72 h（酵母菌） ，進(jìn)行活菌菌落計(jì)數(shù) 。試驗(yàn) 3 次，計(jì)算抑菌率。抑菌性能試驗(yàn)步驟見圖 E.2。

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圖E.2    抑菌性能試驗(yàn)步驟

E.6.7.5   試驗(yàn)成立條件

測試樣和對照樣樣品吸液量組內(nèi)、組間誤差［計(jì)算見公式 （E.2）］ 要求均在 15％以內(nèi)。

對照樣 “0” 時(shí)回收菌量不少于 1.0×103   CFU/mL～1.0×104CFU/mL ，且 24 h 的回收菌量比“0” 時(shí)增加 2 個(gè)對數(shù)值（   lg） 以上。

E.6.7.6   計(jì)算公式

抑菌率計(jì)算見式 （E.15）：

Y = 100%

…………………………

（E.15）

Nc   ─接觸24 h后對照樣品平均菌落數(shù)，單位為每克菌落形成單位（CFU/g）；

Ns    ─接觸24 h后被試樣品平均菌落數(shù)，單位為每克菌落形成單位（CFU/g）。

E.6.7.7    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

各次試驗(yàn)抑菌率大于或等于 99％判斷有抑菌作用。 E.6.7.8    注意事項(xiàng)

吸取回收液接種培養(yǎng)時(shí)，如混入吸水材料可能會影響試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。 E.7    穩(wěn)定性測試方法

E.7.1    測試條件

E.7.1.1    室溫留樣 ：將原包裝樣品置 25 ℃±1 ℃ 下按產(chǎn)品使用說明規(guī)定的時(shí)間存放后抽樣進(jìn)行抑菌、抗

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菌或殺菌性能測試。

E.7.1.2   加速試驗(yàn)（微生物法）：將原包裝樣品置 54 ℃±1 ℃ 恒溫箱內(nèi) 14 d 或 37 ℃±1 ℃ 恒溫箱內(nèi) 90 d 或 40 ℃~45 ℃ 恒溫箱內(nèi) 180 d 或 35 ℃~40 ℃ 恒溫箱內(nèi)270 d，固體產(chǎn)品保持相對濕度（75±5）％，存放后抽 樣進(jìn)行抑菌、抗菌或殺菌性能測試。

E.7.1.3   加速試驗(yàn)（化學(xué)測定法）： 將原包裝樣品置 54 ℃±1 ℃ 恒溫箱內(nèi) 14 d 或 37 ℃±1 ℃ 恒溫箱內(nèi) 90 d 或 40 ℃~45 ℃ 恒溫箱內(nèi) 180 d 或 35 ℃~40 ℃ 恒溫箱內(nèi) 270 d，固體產(chǎn)品保持相對濕度（75±5）％，于 放置前、后分別測定抑菌、抗菌或殺菌有效成分含量。

E.7.2    評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

E.7.2.1    自然留樣 ：其抑菌率或殺菌率達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值，產(chǎn)品的抑菌、抗菌或殺菌作用有效期為自然 留樣時(shí)間。

E.7.2.2   加速試驗(yàn)（微生物法）： 經(jīng) 54 ℃ 加速試驗(yàn)，其抑菌率或殺菌率達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值，產(chǎn)品的抑 菌、抗菌或殺菌作用有效期室溫條件下為 1 年 。經(jīng) 37 ℃ 加速試驗(yàn)，其抑菌率或殺菌率達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn) 值，產(chǎn)品的抑菌 、抗菌或殺菌作用有效期室溫條件下為 2 年 。若經(jīng) 40 ℃~45 ℃ 存放 180 d 或 35 ℃~ 40 ℃ 存放 270 d，其抑菌率或殺菌率達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)值，產(chǎn)品的抑菌 、抗菌或殺菌作用有效期室溫條件 下為 3 年。

E.7.2.3    加速試驗(yàn)（化學(xué)測定法）： 經(jīng) 54 ℃ 存放 14 d，有效成分下降率小于 10％，且存放后有效成分 含量均不低于產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的下限值，則貯存有效期可定為 1 年。若經(jīng) 37 ℃ 存放 90 d，有效成 分下降率小于 10％，且存放后有效成分含量均不低于產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的下限值，則貯存有效期可 定為 2 年 。若經(jīng) 40 ℃~45 ℃ 存放 180 d 或 35 ℃~40 ℃ 存放 270 d，有效成分下降率小于 10％，且存放后有效成分含量均不低于產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定含量的下限值，則貯存有效期可定為 3 年。

E.7.2.4    當(dāng)自然留樣與加速試驗(yàn)微生物法或化學(xué)測定法結(jié)果不一致時(shí)，以自然留樣結(jié)果作為判定依據(jù)； 當(dāng)加速試驗(yàn)抑菌率或殺菌率結(jié)果與化學(xué)測定法結(jié)果不一致時(shí)，以抑菌率或殺菌率結(jié)果作為判定依據(jù)。

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附   錄    F

（規(guī)范性）

產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)方法

F.1   試驗(yàn)方法

皮膚刺激試驗(yàn) 、 眼刺激試驗(yàn) 、 陰道黏膜刺激試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法按 GB/T 38496 和 WS/T 10009 中相應(yīng)的試驗(yàn)方法進(jìn)行。

固體產(chǎn)品的樣品制備方法按照 F.2 進(jìn)行。

注1：用于皮膚刺激試驗(yàn)中的空白對照為生理鹽水和斑貼紙。

注2：在皮膚變態(tài)反應(yīng)中，誘導(dǎo)處理和激發(fā)處理所用的劑量保持一致。

F.2   樣品制備                                                   

F.2.1    皮膚刺激試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

以橫斷方式剪一塊斑貼大?。?.5 cm×2.5 cm） 的產(chǎn)品 。干性產(chǎn)品，如尿布、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品， 用生理鹽水潤濕后貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋 。濕性產(chǎn)品可以按要求裁剪合適的面積，直接貼到皮膚 上，再用斑貼紙覆蓋。

F.2.2    眼刺激試驗(yàn)

F.2.2.1    干性產(chǎn)品

以橫斷方式剪取足夠重量的產(chǎn)品，先測定產(chǎn)品的 “ 吸收容量” ，即每克產(chǎn)品所吸收的浸提液總量； 以同樣方式剪取同樣重量的產(chǎn)品，除產(chǎn)品的“ 吸收容量”外，再按 1.0 g/10.0 mL 的比例加入滅菌生理鹽 水進(jìn)行浸提，密封于萃取容器中攪拌后置于 37 ℃±1 ℃ 下 24 h。冷卻到室溫，攪拌后析取樣液備檢。

F.2.2.2   濕性產(chǎn)品

在進(jìn)行眼刺激試驗(yàn)的當(dāng)天，擠出產(chǎn)品里的擠出液作為試樣。 F.2.3    陰道黏膜刺激試驗(yàn)

F.2.3.1    干性產(chǎn)品

以橫斷方式剪取足夠重量的產(chǎn)品，先測定產(chǎn)品的 “ 吸收容量” ，即每克產(chǎn)品所吸收的浸提液總量； 以同樣方式剪取同樣重量的產(chǎn)品，除產(chǎn)品的“ 吸收容量”外，再按 1.0 g/10.0 mL 的比例加入滅菌生理鹽 水進(jìn)行浸提，密封于萃取容器中攪拌后置于 37 ℃±1 ℃ 下 24 h。冷卻到室溫，攪拌后析取樣液備檢。

F.2.3.2   濕性產(chǎn)品

在進(jìn)行陰道黏膜刺激試驗(yàn)的當(dāng)天，擠出產(chǎn)品里的擠出液作為試樣。 F.3   判定標(biāo)準(zhǔn)

以 GB/T 38496 和 WS/T 10009 的相應(yīng)部分作為試驗(yàn)結(jié)果判定原則。

GB 15979—2024

參   考   文   獻(xiàn)

［1］ WS 575—2017   衛(wèi)生濕巾衛(wèi)生要求

［2］ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于發(fā)布化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015 年版）的公告（2015 年第 268 號）（ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局）